鑠思百檢測

DETECTION OF TECHNICAL SOUSEPAD

激光共聚焦掃描顯微鏡（CLSM）

u設(shè)備型號

萊卡SP8

u樣品準(zhǔn)備須知?。?！

1、如果您的樣品需要低溫寄送，4℃左右可用冰袋寄送，-20℃和-80℃請干冰寄送。

如需前處理請客戶務(wù)必于送樣單內(nèi)附上詳盡的實(shí)驗(yàn)方案和處理步驟；實(shí)驗(yàn)所需的細(xì)胞和試劑等可自行提供

2、需要提供：可直接用于拍攝的片子（直接上機(jī)拍攝）或者實(shí)驗(yàn)所需的樣品（含前處理方案+制片方法）

u樣品測試填寫要求注意事項(xiàng)

所需要拍攝的模式：2D;3D

相關(guān)試劑信息：如有自行提供的本次實(shí)驗(yàn)相關(guān)的試劑請?jiān)诒碇辛谐?，便于我方簽收核?/span>

u樣品要求

一、菌液/污泥/污水類樣品

1. 樣品量

5000 rpm離心10 min，可得到綠豆大小沉淀，參考圖（1.5 mL離心管）大小的菌體沉淀。

2. 寄送要求

（1）若為細(xì)菌類需要死活染色/ROS染色的，一般加冰袋泡沫盒4度保存，樣品不和冰袋接觸。

（2）若為蛋白/多糖類染色，一般加冰袋泡沫盒4度保存或者2.5%的戊二醛固定4度保存，樣品不和冰袋接觸。

（3）若為污泥類樣品可以進(jìn)行冰切或者刀切，冰切收費(fèi)50/樣。

二、生物膜樣品

1. 樣品量

金屬/瓷磚/巖石等塊體類建議長寬高尺寸不超過1 cm，薄膜類直徑尺寸不超過2 cm；且均要求樣品表面平整，需要標(biāo)出拍攝面。

2. 寄送要求

（1）一般加冰袋泡沫盒4度保存，樣品不和冰袋接觸；

（2）若在爬片上培養(yǎng)生物膜，可將爬片粘于培養(yǎng)皿底部，充滿培養(yǎng)基，封口膜密封完全，再4度保存。

三、植物類

1. 說明：

（1）植物類樣品可進(jìn)行簡單冰切及刀切，軟化等特殊類請走病理組織切片測試項(xiàng)目；

（2）一般加冰袋泡沫盒4度保存，樣品不和冰袋接觸；

（3）鑠思百做過的植物類樣品淀粉、胡蘿卜，土豆、葉片、根、莖，擬南芥等。

四、需要與細(xì)胞共培養(yǎng)的樣品

（一）塊體類—薄膜、布料、金屬塊、紙片、凝膠等

1. 送樣量

（1）與細(xì)胞的作用方式為直接接觸的話，至少1個(gè)/種細(xì)胞/時(shí)間點(diǎn)；

（2）樣本處理方式為浸提的話，可參考國標(biāo)ISO 10993-12 2007中的浸提方式浸提，根據(jù)浸提方式按量和檢測時(shí)間點(diǎn)提供；

2. 制樣要求

若是需要把細(xì)胞接種到材料上的話，金屬塊、凝膠類樣本須制備成統(tǒng)一大小的圓形/方形，建議制備直徑為10-15 mm圓形。布料、紙片類樣本可代為裁剪，默認(rèn)制備直徑為15 mm。

（二）液體類

a. 若采用稀釋后樣本測試，則須告知稀釋倍數(shù)及工作液濃度；

b. 若溶劑為有機(jī)溶劑（如DMSO，醇類，酚類等），最高工作液濃度中，溶劑的占比低于0.5%。

（三）粉末類

送樣量：根據(jù)測試時(shí)樣本濃度和檢測時(shí)間點(diǎn)而定，按照單次檢測需要的3-5倍的量寄送；

a. 若為可溶性粉末：注明溶劑的種類（如無水乙醇，異丙醇，DMSO，培養(yǎng)基，PBS或者生鹽水等），當(dāng)樣品對溶劑有特殊需求時(shí)，請?jiān)谒蜆訒r(shí)附加所需溶劑；

b. 若為不可溶粉末：注明樣本性質(zhì)，滅菌方式，及分散為均勻懸浮液所需必要步驟。

（五）無需染色直接拍攝類樣品

1.細(xì)胞類樣品直接拍攝，需要封片后常溫避光郵寄。

2. 固體類直接拍攝樣品建議長寬不超過20mm，厚度不超過10mm，重量不超過10g，一定標(biāo)出測試面。

3. 微米材料直接拍攝類建議進(jìn)行云視頻溝通，且微粒尺寸不低于5微米。

其他說明：

1. 激發(fā)和發(fā)射波長說明：需要提供清楚激發(fā)/發(fā)射波長，拍攝類型2D/3D，拍攝倍數(shù)等要求；

2. 染料說明：需要您標(biāo)明染料名稱和拍攝條件（激發(fā)/發(fā)射波長）；

u項(xiàng)目簡介

Confocal 利用放置在光源后的照明針孔和放置在檢測器前的探測針孔實(shí)現(xiàn)點(diǎn)照明和點(diǎn)探測，來自光源的光通過照明針孔發(fā)射出的光聚焦在樣品焦平面的某個(gè)點(diǎn)上，該點(diǎn)所發(fā)射的熒光成像在探測針孔上，該點(diǎn)以外的任何發(fā)射光均被探測針孔阻擋。照明針孔與探測針孔對被照射點(diǎn)或被探測點(diǎn)來說是共軛的，因此被探測點(diǎn)即共焦點(diǎn)，被探測點(diǎn)所在的平面即共焦平面。計(jì)算機(jī)以像點(diǎn)的方式將被探測點(diǎn)顯示在計(jì)算機(jī)屏幕上，為了產(chǎn)生一幅完整的圖像，由光路中的掃描系統(tǒng)在樣品焦平面上掃描，從而產(chǎn)生一幅完整的共焦圖像。只要載物臺(tái)沿著Z軸上下移動(dòng)，將樣品新的一個(gè)層面移動(dòng)到共焦平面上，樣品的新層面又成像在顯示器上，隨著Z軸的不斷移動(dòng)，就可得到樣品不同層面連續(xù)的光切圖像 。

服務(wù)周期：一般為樣品接收后的2-3周，具體實(shí)驗(yàn)周期及送樣時(shí)間請與工程師溝通確認(rèn)，謝謝！

<結(jié)果反饋請?jiān)跍y試完成一周內(nèi)，不建議回收樣品，如有需要請?zhí)崆胺答伣o工程師

u結(jié)果展示

一、交付內(nèi)容

1.
選擇2D模式拍攝：每個(gè)樣品交付3-4張圖片，其中

（1）若一個(gè)樣品拍攝1個(gè)倍數(shù)，拍4個(gè)視野；

（2）若一個(gè)樣品拍攝2個(gè)倍數(shù)，各拍攝2個(gè)視野；

（3）若一個(gè)樣品拍攝3個(gè)倍數(shù)，各拍攝1個(gè)視野。

<注：除死活染色外，其他項(xiàng)目還會(huì)導(dǎo)出明場圖片>

2. 選擇3D模式拍攝：一個(gè)樣品拍攝1個(gè)倍數(shù)，拍1個(gè)視野。

Bright field

Dark field

Merged

u常見問題

1. 目前激光共聚焦有哪些激光器配置？

405nm，458nm，488nm，515nm，559nm，635nm，其他激光器需要單獨(dú)聯(lián)系工程師。

2. 浸提液常用國標(biāo)ISO 10993-12 2007介紹