液質(zhì)聯(lián)用（LC-MS）

?項(xiàng)目簡(jiǎn)介

LCMS是指將液相色譜儀和質(zhì)譜儀聯(lián)合起來(lái)使用的儀器，主要用于不易揮發(fā)、強(qiáng)極性、熱不穩(wěn)定及高分子量化合物的分析，具體分為定性與定量。

LCMS主要可解決如下幾方面的問(wèn)題：不揮發(fā)性化合物分析測(cè)定；極性化合物的分析測(cè)定；熱不穩(wěn)定化合物的分析測(cè)定等。但是，區(qū)別于氣質(zhì)聯(lián)用（GCMS），LCMS一般沒(méi)有商品化的譜庫(kù)可對(duì)比查詢，只能自行解譜。所以，目前液質(zhì)聯(lián)用在環(huán)境領(lǐng)域，主要應(yīng)用于有標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)參照情況下的定性分析。

另外，所有色譜質(zhì)譜類(lèi)測(cè)試，涉及參數(shù)往往很多。我們會(huì)依據(jù)您的參考文獻(xiàn)，結(jié)合實(shí)驗(yàn)室現(xiàn)存條件與經(jīng)驗(yàn)，盡量使用相同或者相似的參數(shù)或配件。由于測(cè)試影響因素太多，沒(méi)有辦法保證測(cè)試參數(shù)或結(jié)果完全符合您的預(yù)期，請(qǐng)慎重考慮，謝謝！

測(cè)試前請(qǐng)務(wù)必詳細(xì)填寫(xiě)對(duì)接單，更多測(cè)試要求請(qǐng)咨詢工程師。

?樣品要求

1.粉體樣品需要提供20mg以上（一定要告知溶于什么溶劑），液體樣品需要提供1ml以上，若樣品含有無(wú)機(jī)鹽離子，可自行除鹽后寄樣，或指定配備除鹽配件的LCMS儀器，或提供固相萃取步驟并告知項(xiàng)目經(jīng)理。樣品需要在常規(guī)溶劑中溶解性較好。

2.

請(qǐng)務(wù)必如實(shí)填寫(xiě)是否含無(wú)機(jī)鹽離子以及濃度：當(dāng)樣品含鹽但是當(dāng)成不含鹽直接進(jìn)樣時(shí)，樣品中的鹽成分會(huì)進(jìn)入離子源造成儀器嚴(yán)重?fù)p害，并嚴(yán)重影響測(cè)試電離信號(hào)，導(dǎo)致質(zhì)譜結(jié)果完全被鹽信號(hào)覆蓋，目標(biāo)產(chǎn)物數(shù)據(jù)非常差?。x器損壞需照價(jià)賠償，數(shù)據(jù)質(zhì)量差請(qǐng)自行承擔(dān)?。?/span>

?結(jié)果展示

（鑠思百只提供儀器數(shù)據(jù)，形式會(huì)隨儀器型號(hào)略做修改，具體繪圖（如下圖）、數(shù)據(jù)分析，本測(cè)試均不提供?。。?/span>

1.總離子流圖TIC：在選定的質(zhì)量范圍內(nèi)，所有離子強(qiáng)度的總和對(duì)時(shí)間的圖,稱(chēng)TIC圖。另外，HPLC和LCMS使用的是不同檢測(cè)器，前者可以包括紫外檢測(cè)器、熒光檢測(cè)器等，后者使用的是質(zhì)譜檢測(cè)器。所以鑠思百僅提供總離子流圖，色譜圖不提供！！

2.質(zhì)譜圖：質(zhì)譜圖一般都采用“條圖”，或稱(chēng)為棒狀圖。在圖中橫軸表示質(zhì)荷比（m/z），縱軸則表示峰的相對(duì)強(qiáng)度（RA，相對(duì)豐度，RA無(wú)單位！）。質(zhì)譜圖具體分為一級(jí)質(zhì)譜、二級(jí)質(zhì)譜。注意：一級(jí)能打出的情況下，二級(jí)不一定能打出！這是質(zhì)譜學(xué)常識(shí)。

3.選擇離子流圖/質(zhì)量色譜圖EIC：指定某一質(zhì)量（或質(zhì)荷比）的離子其強(qiáng)度對(duì)時(shí)間所作的圖。指南針每個(gè)樣品可以免費(fèi)為您通過(guò)儀器手動(dòng)篩選五個(gè)分子式，篩選是根據(jù)分子式及其分子量，通過(guò)一級(jí)質(zhì)譜確定的，誤差在ppm級(jí)別，作為輔助判斷這五個(gè)物質(zhì)是否存在的一種方式。注意：分子式不是結(jié)構(gòu)式，您需要提供的是CxHyOz這種類(lèi)型的分子式。其原理就是利用質(zhì)量色譜圖來(lái)確定目標(biāo)物質(zhì)的特征離子是否存在。

4.本測(cè)試不包含數(shù)據(jù)分析以及作圖服務(wù)，僅提供測(cè)試數(shù)據(jù)?。∪缧钄?shù)據(jù)分析，本公司數(shù)據(jù)分析部門(mén)收費(fèi)提供。如需提供源文件，請(qǐng)務(wù)必提前說(shuō)明。注意：源文件往往需要儀器配套的軟件打開(kāi)，由于該軟件被各儀器廠商用序列號(hào)控制（儀器和軟件之間一對(duì)一綁定，在別的計(jì)算機(jī)上裝不了），因此對(duì)應(yīng)軟件我們不提供！

5.正負(fù)譜的選擇，一般根據(jù)您樣品目標(biāo)物查閱文獻(xiàn)來(lái)確定。很多客戶會(huì)通過(guò)“容易得到質(zhì)子的物質(zhì)用正譜，比如胺類(lèi)物質(zhì)；容易失去質(zhì)子的物質(zhì)用負(fù)譜測(cè)試，比如有機(jī)酸類(lèi)物質(zhì)”做判斷。但我們還是建議具體一定要根據(jù)文獻(xiàn)確認(rèn)?。。〔幻鞔_正負(fù)譜的強(qiáng)烈建議正負(fù)都做?。?/span>

6.LCMS測(cè)試，不同于icp等測(cè)試，測(cè)試條件、后續(xù)自行分析都較為復(fù)雜，請(qǐng)您適當(dāng)積累一定的測(cè)試知識(shí)，便于您后續(xù)數(shù)據(jù)處理。

?常見(jiàn)問(wèn)題

1. 串聯(lián)質(zhì)譜如何定量？

答∶LCMS定量時(shí)，是以后面產(chǎn)生的碎片峰定量。但是這一子離子是由母離子在碰撞室產(chǎn)生的特征性碎片，所以一般用MRM模式。除填寫(xiě)對(duì)接單外，當(dāng)您要做定量時(shí)，需要在對(duì)接單中額外補(bǔ)充：

A、目標(biāo)物質(zhì)的標(biāo)品-做外標(biāo)；

B、目標(biāo)物質(zhì)的子母離子對(duì)-確認(rèn)定量碎片；

C、目標(biāo)物質(zhì)的濃度范圍-決定外標(biāo)定量范圍。

2. 樣品含鹽該怎么處理？

答∶具體分為切閥除鹽（在線）或者固相萃取除鹽（離線）。

（1）切閥除鹽（在線）：優(yōu)點(diǎn)是不需要額外的前處理工作，缺點(diǎn)是前2min左右沒(méi)有數(shù)據(jù)。

LCMS測(cè)試低濃度鹽時(shí)（一般保穩(wěn)起見(jiàn)耐受20mmol/L以下），可以使用切閥除鹽，也就是色譜段前端大約前1~2min的位置是當(dāng)成廢液排掉的。因此，總離子流圖里面對(duì)應(yīng)除鹽時(shí)間段的質(zhì)譜圖不可以使用。如下圖，1.5min左右以前，沒(méi)有數(shù)據(jù)。

（2）固相萃取除鹽（離線）：優(yōu)點(diǎn)是可以除鹽外加富集目標(biāo)物質(zhì)（后者在天然樣品有機(jī)物定量過(guò)程中使用較廣泛，因?yàn)橐话闾烊粯油枯^低，低于檢出限，但是富集之后可以在檢出限內(nèi)進(jìn)行定量）。缺點(diǎn)是需要確認(rèn)合適的萃取步驟并進(jìn)行額外的前處理萃取工作。

LCMS測(cè)試高濃度鹽樣或者目標(biāo)產(chǎn)物比較低的時(shí)候（如自然水體抗生素測(cè)試），可以先進(jìn)行萃取柱除鹽以及富集，之后再進(jìn)行LCMS測(cè)試。具體的萃取過(guò)程務(wù)必由客戶提供，因?yàn)椴煌繕?biāo)物質(zhì)萃取步驟往往有所區(qū)別，根據(jù)目標(biāo)物選擇合適的萃取柱與萃取步驟，對(duì)檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性有著至關(guān)重要的作用。

3. 儀器的檢出限是多少？

答∶正如毒理學(xué)中“拋開(kāi)劑量談毒性”的含義，LCMS檢出限也并不是一個(gè)準(zhǔn)確值。

檢出限的定義為：某特定分析方法在給定的置信度內(nèi)可從樣品中檢出待測(cè)物質(zhì)的最小濃度或最小量。即，拋去其他細(xì)節(jié)因素，主要影響LCMS檢出限的是測(cè)試方法以及對(duì)應(yīng)測(cè)試物質(zhì)。

舉例：假如客戶A的樣品是液體樣，需要檢測(cè)其中四環(huán)素的含量。那么我們需要先按照測(cè)試方法設(shè)置好儀器，然后進(jìn)標(biāo)樣，直到可以判定標(biāo)品中存有濃度明顯高于空白（大多是3倍噪聲）的四環(huán)素出峰，這一標(biāo)樣濃度可以稱(chēng)為檢出限。

如果在自身樣品各種信息都沒(méi)有提供的前提下，直接問(wèn)儀器檢出限是多少？就說(shuō)明欠缺對(duì)檢出限定義、LCMS基礎(chǔ)原理的理解。

4. 質(zhì)譜總離子流圖TIC和自己在實(shí)驗(yàn)室做的HPLC圖對(duì)不上？

答∶這也是對(duì)LCMS、HPLC原理理解不足，經(jīng)常問(wèn)出的問(wèn)題。

液相色譜可以后搭多種檢測(cè)器，如紫外檢測(cè)器，熒光檢測(cè)器、蒸發(fā)光檢測(cè)器、質(zhì)譜檢測(cè)器等。搭配質(zhì)譜檢測(cè)器的這類(lèi)稱(chēng)為LCMS。兩者本身的重點(diǎn)就有所偏重。前面幾種檢測(cè)器，在判定物質(zhì)時(shí)，更依賴(lài)于標(biāo)品定性，一般是默認(rèn)一個(gè)峰為一個(gè)物質(zhì)，因此對(duì)分峰要求較為嚴(yán)格；而LCMS由于其質(zhì)譜檢測(cè)器的靈敏性，重點(diǎn)在于碎片的區(qū)分。即使LCMS上顯示是一個(gè)峰，也可以根據(jù)質(zhì)譜數(shù)據(jù)判定前半個(gè)峰、后半個(gè)峰、甚至峰頂是否是同一個(gè)物質(zhì)。

之前有客戶需求，在自己實(shí)驗(yàn)室已經(jīng)做過(guò)HPLC，有11個(gè)峰，但是不知道是什么物質(zhì)，無(wú)法買(mǎi)對(duì)應(yīng)標(biāo)品去定性。希望我們?cè)谥改厢?/span>LCMS儀器上幫他定出那11個(gè)峰具體是什么。

該需求暴露出的問(wèn)題：提問(wèn)者以自身實(shí)驗(yàn)室HPLC的方法強(qiáng)行套在LCMS儀器上。

LCMS儀器本身不是用于優(yōu)化峰的儀器，強(qiáng)行優(yōu)化實(shí)際是做一個(gè)方法學(xué)開(kāi)發(fā)，費(fèi)用非常高；即使強(qiáng)行優(yōu)化，由于LCMS儀器不可能和客戶實(shí)驗(yàn)室HPLC配置一摸一樣，強(qiáng)行進(jìn)行也不能保證結(jié)果，風(fēng)險(xiǎn)較大。

5. 數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)比能做嗎？

答∶液質(zhì)數(shù)據(jù)庫(kù)均是付費(fèi)數(shù)據(jù)庫(kù)，且與儀器一一關(guān)聯(lián)，目前我們有兩臺(tái)儀器安捷倫1290-Qtof購(gòu)置了中草藥庫(kù)，如果需要篩選請(qǐng)務(wù)必提前說(shuō)明。如果您的樣品與中草藥無(wú)關(guān)，樣品中的目標(biāo)組分大部分都不會(huì)在數(shù)據(jù)庫(kù)中被收錄，篩選也沒(méi)有任何意義。

6. 為什么不能用HPLC條件來(lái)做LCMS？

答：HPLC和LCMS是兩種測(cè)試方法，HPLC搭配的是熒光或者紫外檢測(cè)器，LCMS搭配的是MS檢測(cè)器。HPLC的流動(dòng)相會(huì)以無(wú)機(jī)鹽作流動(dòng)相，而對(duì)LCMS來(lái)說(shuō)，無(wú)機(jī)鹽進(jìn)入LCMS質(zhì)譜部分會(huì)嚴(yán)重污染離子源，損害儀器。所以需要您結(jié)合文獻(xiàn)確認(rèn)LCMS 的測(cè)試條件及儀器參數(shù)。

7. 篩選分子式結(jié)果如何查看？

答：文件名包含EIC（選擇離子流圖），篩選的分子式不會(huì)都出現(xiàn)在結(jié)果中，如果沒(méi)篩選到不會(huì)顯示在文件中。

8. 目標(biāo)物篩選分子式是什么，有什么作用？

答：我們可以免費(fèi)為您通過(guò)儀器手動(dòng)篩選五個(gè)分子式，篩選是根據(jù)分子式及其分子量，通過(guò)一級(jí)質(zhì)譜確定的，誤差在ppm級(jí)別，作為輔助判斷這五個(gè)物質(zhì)是否存在的一種方式。但是，篩選分子式只是一種定性的輔助手段，有的時(shí)候分子碎片匹配上了，也有可能不是對(duì)應(yīng)物質(zhì)。例：需要匹配的目標(biāo)物質(zhì)A分子量為“M”，打的是負(fù)譜，結(jié)合可能的加和離子形式，儀器匹配的分子量為“【M-H】”，在誤差范圍10ppm內(nèi)，該物質(zhì)A理論能匹配上；但是如果同時(shí)存在另一種物質(zhì)B的碎片峰的分子量為“【M-H】±誤差范圍值”，那么A和B理論都能匹配上。因此通過(guò)碎片峰篩選匹配只能作為定性的一種輔助手段，準(zhǔn)確確認(rèn)建議走標(biāo)品驗(yàn)證，并結(jié)合其他表征手段（比如核磁、紅外等）來(lái)實(shí)現(xiàn)。

?測(cè)試提示：

1.可開(kāi)正規(guī)測(cè)試發(fā)票，附帶測(cè)試清單。

2.有腐蝕性，毒性，或其他有危害性等特殊樣品要事先告知測(cè)試人員，測(cè)試人員也要告知樣品方哪些樣品不能測(cè)或會(huì)對(duì)儀器產(chǎn)生損傷，測(cè)試后會(huì)對(duì)樣品產(chǎn)生哪些變化；

3.客戶需提供詳細(xì)的樣品資料，包括元素，主要成分和詳細(xì)測(cè)試參數(shù)及條件。和測(cè)試人員充分討論，商定最終測(cè)試條件；

4.測(cè)試人員與顧客通過(guò)QQ，微信或郵件溝通，出現(xiàn)測(cè)試糾紛，郵件或聊天記錄將作為重要的仲裁依據(jù)；請(qǐng)加QQ和技術(shù)人員交流。QQ：82187958。微信：15071040697

5.杜絕測(cè)試、解析和合成違反國(guó)家相關(guān)法律法規(guī)的樣品，一經(jīng)發(fā)現(xiàn)將追究其法律責(zé)任。