標準曲線怎么制作？

標準曲線的制作中，會有這樣那樣的問題，比如，常有人問：一定要做5個點？線性相關(guān)系數(shù)R值必須幾個9才達標？標曲是每天都做還是每次都做？標曲是否必須通過原點？……鑠思百檢測整理了標曲相關(guān)問題，一起來看看吧！

1、標準曲線的制作依據(jù)？

GB/T22554-2010《基于標準樣品的線性校準》中：

（1）標準曲線的濃度范圍應(yīng)覆蓋正常操作條件下的被測量范圍；

（2）標準樣品的組分盡量與被測樣品組分一致；

（3）標準樣品的濃度值應(yīng)等距離的分布在被測量范圍；

（4）標準樣品的個數(shù)至少應(yīng)有3個濃度；

（5）每個標準點至少重復(fù)2次，這個重復(fù)是指從稀釋開始；

如果國家標準有相應(yīng)的濃度系列推薦，盡量按國家標準。工作中我們經(jīng)常采用線性校準，因為線性方程最為簡潔。

2、什么是校準曲線

校準曲線包括標準曲線和工作曲線，前者用標準溶液系列直接測量，沒有經(jīng)過預(yù)處理過程，這對于樣品往往造成較大誤差；而后者所使用的標準溶液經(jīng)過了與樣品相同的消解、凈化、測量等全過程。

3、首先標曲要做幾個點？

4~6個點：對于平時測量的樣品濃度范圍較寬，并且檢測器響應(yīng)不完全是一次曲線（直線）的，可以采用二次曲線或分段校正方式，以減少數(shù)據(jù)偏差，這種情況就需要多用幾個數(shù)據(jù)點，如果不分段，數(shù)據(jù)點有4~6個就夠用。

4、標曲R值是幾個9才合格？

5、標準曲線的檢驗？

（1）線性檢驗：

即檢驗校準曲線的精密度。對于以4～6個濃度單位所獲得的測量信號值繪制的校準曲線，分光光度法一般要求其相關(guān)系數(shù)|r|≥0.9990，否則應(yīng)找出原因并加以糾正，重新繪制合格的校準曲線。

（2）截距檢驗：

（3）斜率檢驗：

即檢驗分析方法的靈敏度，方法靈敏度是隨實驗條件的變化而改變的。在完全相同的分析條件下，僅由于操作中的隨機誤差導(dǎo)致的斜率變化不應(yīng)超出一定的允許范圍，此范圍因分析方法的精度不同而異。例如，一般而言，分子吸收分光光度法要求其相對差值小于5%，而原子吸收分光光度法則要求其相對差值小于10%等等。

6、標準曲線有效期的規(guī)定？

（1）標準曲線屬于實驗室質(zhì)量控制的范圍，按照《實驗室資質(zhì)認定評審準則》中結(jié)果控制的要求：定期使用有證標準物質(zhì)（參考物質(zhì)）進行監(jiān)控和/或使用次級標準物質(zhì)（參考物質(zhì)）開展內(nèi)部質(zhì)量控制。

（2）準則中并未對“定期”進行規(guī)定，所以如果“定期”，就根據(jù)實驗室的實際情況來定了。

（3）既然準則上沒說明，那根據(jù)一般的分析教材，當實驗條件（包括藥劑、人員、儀器等）發(fā)生變化時，最好重新制作標準曲線。一般來說儀器如果長期使用，并經(jīng)過檢定，是處于穩(wěn)定狀態(tài)，而人員藥劑的變化往往會較大。如果說每次換個人操作都要換曲線，那工作量就太大了。

7、每次開機都必須做標準曲線？

從藥品檢測的要求來說，因為：

1、每天所配的流動相都會有所不同，導(dǎo)致出峰的時間都會有一定的差異，峰面積相應(yīng)都有所差異。

2、檢測器光能也在不斷的衰弱，因此其每天的相應(yīng)值也有所不同，其峰面積也有差異。

基于以上原因，原則上應(yīng)該是每天都要進行標準曲線校正的。

標準曲線不要每次都做，但是每次必須進標準品樣品；因為每次你的流動相和原來的不可能完全一樣，同時儀器的狀態(tài)也在變化，所以不同批次間的保留時間是不一致的，所以你必須用隨行標準品來定位與定量。

8、校準曲線能不能長期使用？

9、標準曲線是否必須過原點？

標準曲線不一定非要過原點，只要線性好就可以了。因為做空白的話基本上不會過原點。過原點是強制過的，實際曲線可能不過，就會造成誤差。不過原點是因為有系統(tǒng)誤差。

針對是否過原點(0，0)問題，可以從原點(0，0)代表的意義來考慮：

即所測組分濃度為零的時候，信號響應(yīng)值（液相色譜也就是峰高或者峰面積）是否也為零。通常來說色譜分析是屬于這種情況的，因而可以把（0，0）點作為一個濃度水平計入標準曲線（甚至不需要真的去配一個濃度為零的標準溶液來進樣），這也是單點法定量的一個依據(jù)；而類似的情況在光譜法測定時就講不通了，濃度為零的標準溶液（本底）響應(yīng)信號（吸光度）往往不是零，這個時候標準曲線就不一定過原點了。

10、標準曲線的線性范圍？

11、相關(guān)系數(shù)的有效數(shù)字？

GB5750.3-2006 8.2.7項有如下規(guī)定：校準曲線相關(guān)系數(shù)只舍不入，保留到小數(shù)點后出現(xiàn)非9的一位，如0.99989→0.9998。如果小數(shù)點后都是9時，最多保留小數(shù)點后4位。

12、Y=bX和二次曲線的選用？

標準曲線我們通常采用的是Y=a+bX，曲線擬合完必須要做統(tǒng)計檢驗，且要做統(tǒng)計完備的線性檢驗和失擬檢驗，然后再做a與0的差別檢驗，如果a與0的統(tǒng)計學(xué)上無差異，你就可以考慮用Y=bX的擬合曲線，擬合出來后同樣做線性檢驗和失擬檢驗，如果線性檢驗合格（P<0.05）且失擬檢驗合格（P>0.05）此時你就可以采用Y=bX。

了解各個分析項目校準曲線斜率的穩(wěn)定性及影響穩(wěn)定性的主要因素，可決定是否能采用帶標點檢驗原校準曲線，省略重新制作校準曲線;從校準曲線斜率的變化，可判斷標準溶液的穩(wěn)定性，從而確定其標定周期;分析低濃度樣品時，應(yīng)使用高純度的水和試劑，以減少空白值，降低樣品的分析誤差。

科學(xué)地運用校準曲線，對于降低分析成本、提高檢測質(zhì)量有著重要的意義。