紫外可見分光光度計的系統(tǒng)誤差對測量吸光度的影響是可以檢查和校正的。關(guān)于操作誤差，多數(shù)情況下，通過嚴格按操作程序測量、實驗室儀器調(diào)零、準確稱量等來控制或減少這種誤差的產(chǎn)生。關(guān)于實驗室儀器的系統(tǒng)誤差，可通過對紫外可見分光光度計的定期校正來克服，那么，紫外可見分光光度計將如何進行校正呢。

為了獲得準確的研究結(jié)果，準確測得樣品溶液的吸光度非常關(guān)鍵。一般來說，分析結(jié)果的不可靠性與偶然誤差和系統(tǒng)誤差有關(guān)。偶然誤差影響測量的精密度，可通過足夠數(shù)量測量的統(tǒng)計處理來減少;系統(tǒng)誤差影響測量結(jié)果的準確度，可在大體相同實驗條件下，用比較一種物質(zhì)的準確測量結(jié)果，使系統(tǒng)誤差統(tǒng)一起來。

一、紫外分光光度計 -紫外可見分光光度法

紫外分光光度計：根據(jù)物質(zhì)的吸收光譜研究物質(zhì)的成分、結(jié)構(gòu)和物質(zhì)間相互作用的有效手段。紫外分光光度計可以在紫外可見光區(qū)任意選擇不同波長的光。物質(zhì)的吸收光譜就是物質(zhì)中的分子和原子吸收了入射光中的某些特定波長的光能量，相應地發(fā)生了分子振動能級躍遷和電子能級躍遷的結(jié)果。由于各種物質(zhì)具有各自不同的分子 、原子和不同的分子空間結(jié)構(gòu)，其吸收光能量的情況也就不會相同，因此，每種物質(zhì)就有其特有的、固定的吸收光譜曲線，可根據(jù)吸收光譜上的某些特征波長處的吸光度的高低判別或測定該物質(zhì)的含量。

紫外可見分光光度法：紫外-可見分光光度法是在190?800mn波長范圍內(nèi)測定物質(zhì)的吸光度，用于鑒別、雜質(zhì)檢查和定量測定的方法。當光穿過被測物質(zhì)溶液時，物質(zhì)對光的吸收程度隨光的波長不同而變化。因此，通過測定物質(zhì)在不同波長處的吸光度，并繪制其吸光度與波長的關(guān)系圖即得被測物質(zhì)的吸收光譜。從吸收光譜中，可以確定最大吸收波長和最小吸收波物質(zhì)的吸收光譜具有與其結(jié)構(gòu)相關(guān)的特征性。因此，可以通過特定波長范圍內(nèi)樣品的光譜與對照光譜或?qū)φ掌饭庾V的比較，或通過確定最大吸收波長，或通過測量兩個特定波長處的吸收比值而鑒別物質(zhì)。用于定量時，在最大吸收波長處測量一定濃度樣品溶液的吸光度，并與一定濃度的對照溶液的吸光度進行比較或采用吸收系數(shù)法求算出樣品溶液的濃度。

二、儀器的校正和檢定

波長：儀器波長的允許誤差為：紫外光區(qū)± lnm , 500nm附近士 2nm。

由于環(huán)境境因素對機械部分的影響，儀器的波長經(jīng)常會略有變動，因此除應定期對所用的儀器進行全面校正檢定外，還應于測定前校正測定波長。常用汞燈中的較強譜線 237. 83nm，253. 65nm，275. 28nm， 296. 73nm，313.16nm，

334.15nm， 365. 02nm，404. 66nm， 435. 83nm，546. 07nm 與576. 96nm；或用儀器中氘燈的486. 02nm與656.10nm譜線進行校正；鈥玻璃在波長 279. 4nm，287. 5nm， 333. 7nm，360. 9nm，418. 5nm， 460. 0nm， 484. 5nm， 536. 2nm 與 637. 5nm 處有尖銳吸收峰，也可作波長校正用，但因來源不同或隨著時間的推移會有微小的變化，使用時應注意；近年來，常使用高氯酸鈥溶液校正雙光束儀器，以10%高氯酸溶液為溶劑，配制含氧化鈥（Ho203 ) 4 % 的溶液，該溶液的吸收峰波長為241. 13nm, 278. l0nm, 287. 18nm，333. 44nm，345.47nm,361, 31nm, 416. 28nm, 451. 30nm，485. 29nm, 536. 64nm和 640.52nm。

吸光度的準確度：可用重鉻酸鉀的硫酸溶液檢定。

取在120℃干燥至恒重的基準重鉻酸鉀約60mg，精密稱定，用0.005mol/L硫酸溶液溶解并稀釋至1000ml，在規(guī)定的波長處測定并計算其吸收系數(shù)，并與規(guī)定的吸收系數(shù)比較：

其關(guān)系可以用朗伯-比爾定律表述如下：

式中：

A為吸光度；

T為透光率；

E為吸收系數(shù)，常用的表示方法 ，其物理意義為當溶液濃度為1%（g/ml）,液層厚度為1cm時的吸光度數(shù)值；

c為100ml溶液中所含物質(zhì)的重量（按干燥品或無水物計算），g；

雜散光的檢查：可按下表所列的試劑和濃度，配制成水溶液，置1cm石英吸收池中，在規(guī)定的波長處測定透光率,應符合表中的規(guī)定。

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