GPC儀器樣品前處理

體積排阻色譜SEC在樣品前處理中，有著獨特的作用，今天鑠思百小編就帶您一起探尋一下GPC的原理，以及GPC樣品前處理中的出色應(yīng)用，一起來學(xué)習(xí)吧！

1.定義

體積排阻色譜法（Size exclusion chromatography，SEC）是利用多孔凝膠固定相的獨特特性，而產(chǎn)生的一種主要依據(jù)分子尺寸大小的差異來進(jìn)行分離的方法，它又稱為空間排阻色譜法（Steric exclusion chromatography）。

2.分類

流動相：水；凝膠過濾色譜（GFC）

流動相：有機(jī)相； 凝膠滲透色譜（GPC）

3.固定相

填料：多孔凝膠（軟性凝膠和剛性凝膠）；

特點1：表面分布大小不一的小孔（如圖）

特點2：凝膠顆粒間存在空隙

4.分離

特點1：

化合物按照分子量大小，分為小分子，中等分子、大分子。

小分子： 能通過小孔、中孔、大孔、空隙；

中等分子：能通過中孔、大孔、空隙；

大分子： 被排阻在外，只能通過填料空隙。

特點2：

分子量越小，越能通過更多不同的孔徑的孔，分子量越大，只能通過一些較大孔徑的孔，分子量足夠大完全被排斥在外，而不能通過孔，只能通過填料間的空隙。

特點3：

能通過的孔越多，所走的距離越長，出峰越慢；能通過的孔越少，所走的距離越短出峰越快。

5.原理

基于分配理論：

6.確定分子量大小

如同色譜質(zhì)譜的定量分析一樣，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線法來定量未知樣品的分析物質(zhì)的濃度。在GPC中組分從柱中的洗脫體積（Ve）與分子量（M）存在對應(yīng)關(guān)系lgM- Ve，我們可先通過配置好的已知分子量的化合物分子，進(jìn)樣后，在凝膠柱上存在對應(yīng)的洗脫體積，來配制標(biāo)準(zhǔn)曲線，在相同色譜條件下，未知的物的分子量，可以通過其洗脫體積，在準(zhǔn)曲線上找到對應(yīng)的分子量。

A: 分子量為10 6 ， 對應(yīng)洗脫體積為V 0

B：分子量為10 3 , 對應(yīng)洗脫體積為V0+VP

X: 未知物，對應(yīng)的洗脫體積為Vx， 可求得其分子量大小

7.兩個極限

極限一：排阻極限

如果要分離的物質(zhì)，分子量足夠大，比填料的最大孔徑都大，所有分子都將被排斥。

極限二：滲透極限

如果要分離的物質(zhì)，分子量足夠小，比填料的最小孔徑都小，所有分子都被滲透。

結(jié)論：體積排阻色譜只能分離凝膠柱處于滲透極限對應(yīng)化合物分子量A和處于排阻極限對應(yīng)化合物分子量B之間的物質(zhì)。

8.舉個例子（土壤中的多環(huán)芳烴的分離）

圖中的藍(lán)色為為土壤萃取物的紫外吸收曲線，可以發(fā)現(xiàn)，色譜峰型較寬，只出現(xiàn)一個混雜的色譜峰，如不處理，將難以進(jìn)行定量分析，黑色線為經(jīng)過SEC處理的土壤提取物，當(dāng)?shù)弥喹h(huán)芳烴流出的時間后（收集點），在其流出時間處收集（紅色部位），將收集物在反相液相色譜上分析，得到如下色譜圖：

經(jīng)過SEC處理的收集物（多環(huán)芳烴），在HPLC上 得到了好的分離，干擾性雜質(zhì)（玉米油、DEHP等）也得到了很好的去除效果。另外GPC得一個典型的應(yīng)用，就是在農(nóng)藥殘留分析中，去除油脂，大分子蛋白、色素。SEC提供了常規(guī)SPE和LLE難以分離處理的復(fù)雜基質(zhì)樣品的前處理手段。