激光共聚焦顯微鏡（LCSM）原理介紹

激光共聚焦顯微鏡（LCSM）原理介紹

LSCM是一種高科技顯微鏡；以熒光顯微鏡成像為基礎(chǔ)，加裝了激光掃描裝置，計(jì)算機(jī)進(jìn)行圖像處理，使用紫外或可見(jiàn)光激發(fā)熒光探針，得到細(xì)胞或組織內(nèi)部細(xì)微結(jié)構(gòu)的熒光圖像。

原理

激光共聚焦顯微鏡（LaserScanning Confocal Microscopy）LSCM，利用放置在激光光源后的照明針孔和放置在檢測(cè)器前的探測(cè)針孔，實(shí)現(xiàn)點(diǎn)照明和點(diǎn)探測(cè)。激光光源通過(guò)照明針孔發(fā)射出的光，聚焦在樣品焦平面的某個(gè)點(diǎn)上，該點(diǎn)所發(fā)射的熒光在探測(cè)針孔上成像，該點(diǎn)以外的任何發(fā)射光均被探測(cè)針孔阻擋。照明針孔與探測(cè)針孔對(duì)被照射點(diǎn)或被探測(cè)點(diǎn)來(lái)說(shuō)是共軛的，因此被探測(cè)點(diǎn)即共焦點(diǎn)，被探測(cè)點(diǎn)所在的平面即共焦平面。計(jì)算機(jī)以“像點(diǎn)”的方式將被探測(cè)點(diǎn)顯示在計(jì)算機(jī)屏幕上，為了產(chǎn)生一幅完整的圖像，由光路中的掃描系統(tǒng)在樣品焦平面上掃描，從而產(chǎn)生一幅完整的共焦圖像。只要載物臺(tái)沿著Z軸上下移動(dòng)，將樣品新的一個(gè)層面移動(dòng)到共焦平面上，樣品的新層面又成像在顯示器上，隨著Z軸的不斷移動(dòng)，就可得到樣品不同層面連續(xù)的光切圖像。

LSCM常用的激光器∶激光掃描共聚焦顯微鏡使用的激光光源有單激光和多激光系統(tǒng)，常用的激光器包括以下四種類(lèi)型:

a)半導(dǎo)體激光器:405 nm (近紫外譜線）;

b)氬離子激光器:457 nm、477 nm、488 nm、514 nm(藍(lán)綠光）;

c）氦氖激光器:543 nm（綠光-氦氖綠激光器)、633 nm(紅光-氦氖紅激光器）;

d )UV激光器（紫外激光器）: 351 nm、364 nm(紫外光)。

此外，該儀器的輔助設(shè)備通常還包括風(fēng)冷、水冷冷卻系統(tǒng)及穩(wěn)壓電源等。

應(yīng)用范圍：動(dòng)植物、細(xì)胞顯微成像、三維層切、時(shí)間序列；微小結(jié)構(gòu)的三維掃描和測(cè)量。

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