gpc測(cè)試對(duì)樣品的要求

GPC不僅可用于小分子物質(zhì)的分離和鑒定，而且可以用來(lái)分析化學(xué)性質(zhì)相同分子體積不同的高分子同系物。

測(cè)試樣品要求

（1）樣品盡量純，而且必須可溶于GPC流動(dòng)相。

（2）為了增加樣品的溶解，可輕微擾動(dòng)（不要?jiǎng)×覔u動(dòng)或用超聲）

GPC柱選擇

對(duì)于GPC而言，選擇合適的色譜柱是成功分離的核心。從溶劑類型分，主要包括有機(jī)相色譜柱，水相色譜柱和蛋白質(zhì)色譜柱。

最常用的有機(jī)相色譜柱常用的填料基質(zhì)是苯乙烯和二乙烯苯的共聚物，一般以懸浮聚合或分散聚合方式制成苯乙烯-乙烯基苯多孔微球，以致孔劑制出所需孔徑和孔容。這類凝膠的特點(diǎn)是孔徑分布比較寬，分子量分離范圍比較大，且柱效高。主要用于非極性有機(jī)溶劑，丙酮、乙醇一類極性溶劑不能應(yīng)用。在有機(jī)溶劑中，有機(jī)凝膠通常都處于溶脹狀態(tài)對(duì)不同的溶劑溶脹因子各不相同，因此不能在柱中直接更換溶劑，進(jìn)樣時(shí)也不能帶進(jìn)大量不良溶劑和空氣。

蛋白質(zhì)的填料柱主要分為兩種，氧化硅和纖維素凝膠。氧化硅基質(zhì)填料的有點(diǎn)是硬度較高，分辨率較高，耐壓性較號(hào)，可以使用較高流速。纖維素凝膠填料的優(yōu)點(diǎn)是用途廣泛，甚者可以同時(shí)分離蛋白和某些高分子的混合物，如PEG和蛋白，但是硬度較低，流出物較多，建議在低流速下使用。

流動(dòng)相選擇

做GPC檢測(cè)時(shí)首先要考慮被測(cè)樣品的溶解情況，以此確定流動(dòng)相，還要考慮柱子的測(cè)試范圍，應(yīng)使被測(cè)物分子量落在柱子的分子量-淋出曲線線性部分之內(nèi)，若柱子范圍太窄則可考慮將不同規(guī)格的柱子串聯(lián)使用。

對(duì)于適用于GPC儀器的每一根柱子都會(huì)配有詳細(xì)的使用說(shuō)明，使用之前應(yīng)認(rèn)真閱讀，嚴(yán)格遵從，特別值得注意的是嚴(yán)禁超壓（超流量），否則會(huì)降低柱效、損毀柱子。如Shim-pack GPC-800系列柱，對(duì)于填充溶劑為THF型或者氯仿型能使用其他的洗提液如甲苯、亞甲基氯化物替換，而對(duì)填充溶劑為DMF型的GPC柱，流動(dòng)相不能被其他洗提液替代。

通常流動(dòng)相溶劑類型的改變應(yīng)當(dāng)在流速不超過(guò)0.5 mL/min時(shí)候進(jìn)行，且對(duì)于同一根柱最好只使用單一類型的溶劑，頻繁的改變流動(dòng)相類型會(huì)縮短柱的壽命，而GPC儀器柱的價(jià)格昂貴，通常上萬(wàn)元一根。流動(dòng)相溶劑最好是色譜級(jí)，否則需用孔徑為0.2~0.45μm的膜過(guò)濾。

制樣方法

以三氯苯為溶劑溶解過(guò)濾PE樣品為例，流程如下：

（1）稱取2 mg樣品直接放入20 ml樣品瓶中。

（2）將10 ml三氯苯加入到樣品瓶中，將蓋放在瓶口但不要壓緊。確保樣品濃度在2 mg/ml左右。

（3）將該樣品瓶放入搖床系統(tǒng)中，設(shè)置溫度為160°C（對(duì)于常溫模式，不需要加熱），如樣品溶解過(guò)程中需要震蕩，請(qǐng)開啟此功能。在此瓶旁邊放置一個(gè)只含15 ml三氯苯的樣品瓶。

（4）一小時(shí)后觀察溶解狀態(tài)，如果樣品溶解不好，可以震蕩，延長(zhǎng)時(shí)間或是提高溫度。

（5） 如果樣品完全溶解到溶劑中，就可以開始過(guò)濾樣品了。打開壓桿，從側(cè)孔插入過(guò)濾片，感覺(jué)到定位豁口入位后緩慢合上壓桿。

（6） 將過(guò)濾槍長(zhǎng)管部分插入20 ml樣品瓶，管口與熱溶劑接觸，短管部分放置在2 ml自動(dòng)進(jìn)樣器小瓶之上。

（7） 確保過(guò)濾槍膠墊與20 ml樣品瓶口完全密封，按下過(guò)濾槍頂部按鈕進(jìn)行過(guò)濾。樣品會(huì)通過(guò)長(zhǎng)管轉(zhuǎn)移并滴入2 ml小瓶中。過(guò)濾速度可通過(guò)旋轉(zhuǎn)1、2、3、4四個(gè)檔位調(diào)節(jié)。

注意：如果密封效果不好，液體會(huì)無(wú)法轉(zhuǎn)移！

（8）更換過(guò)濾片到下一個(gè)位置，重復(fù)過(guò)濾其他樣品。

（9） 完成全部樣品過(guò)濾后，用之前準(zhǔn)備的15 ml加熱的三氯苯溶劑重復(fù)過(guò)濾操作，對(duì)過(guò)濾槍進(jìn)行清洗。

（10）將過(guò)濾好的2 ml樣品瓶壓蓋，放到GPC220進(jìn)樣器中進(jìn)行樣品測(cè)定。