鑠思百檢測

DETECTION OF TECHNICAL SOUSEPAD

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HPLC峰型問題之拖尾峰的原因和解決方法

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發(fā)表時間:2023-11-20 14:36作者:鑠思百檢測

拖尾峰又叫后延峰,拖尾峰表現(xiàn)為前沿陡峭,后沿較前沿平緩的不對稱峰。液相色譜峰拖尾是指樣品組分的峰形在色譜圖中呈現(xiàn)出拖尾的現(xiàn)象,這會影響樣品的分離效果和定量分析的準確性。以下是一些可能導致液相色譜峰拖尾的原因及解決辦法:



拖尾峰

拖尾峰原因及解決方法

拖尾峰主要由柱內填料污染,色譜柱被堵塞,樣品濃度過高致使柱超載,柱外效應,硅醇基團作用等原因導致。今天鑠思百檢測小編為大家整理了相關信息。

柱內填料污染

  • 原因:流動相和樣品中的雜質易造成色譜柱內填料污染,導致拖尾峰出現(xiàn)。

  • 解決方法:1.流動相所用的各種溶劑至少是分析純,盡量使用色譜純試劑。2.流動相所用的水最好是超純水或全玻璃器皿雙蒸水。用前先用0.45um溶劑微孔過濾(器)過濾,除去可能存在的微粒。3.流動相建議現(xiàn)用現(xiàn)配,對于含鹽的溶液尤其注意長置會產(chǎn)生細菌或出現(xiàn)沉淀。此外還得保證儲存流動相的容器清潔。4.復雜樣品可選用0.45um溶劑微孔過濾(器)或樣品預處理柱對樣品進行預處理,確保樣品中不含微粒雜質。若樣品不便處理,要使用保護柱。


色譜柱被堵塞

  • 原因:色譜柱的進出口的篩板堵塞,樣品進入色譜柱時會受阻,液體流動受阻形成延遲,使得樣品在相中停留時間變長,從而使峰型拖尾。

  • 解決方法:
    1.配置流動相時污染流動相使用色譜純溶液,現(xiàn)配現(xiàn)用,并通過4.5um濾膜過濾后方可使用。
    2.型號規(guī)格插口不匹配,在扭緊的時候造成形變而促使管道阻塞。色譜柱有物理損壞是會造成峰形拖尾。唯一的解決方法就是更換新柱。
    3.樣品存在雜質,導致堵塞在篩板處,過濾樣品
    4.應用較高濃的緩存鹽溶液,在關機時將會在出入口端結晶體成塊并導致阻塞。

5.適當降低溫度,讓試劑溶解得慢一些。

6.如以上方法都不能解決堵塞問題,則需考慮換一根新的手性色譜柱。



樣品濃度過高致使柱超載

  • 原因:樣品在柱上超載能引起峰展寬,拖尾(或伸舌)。

  • 解決方法:適當減小進樣量或樣品濃度(需要時,可提高檢測器靈敏度)直至峰形和保留時間不再改變,便可消除這種不良影響。減小進樣量還能改善其分離度。正常情況下,樣品中每種化合物在150×4.6mm柱中進樣量保持在3~50ug范圍內,不會引起明顯超載。



柱外效應

  • 原因:柱外效應(即進樣閥、色譜柱及檢測器間的管路過長、直徑過粗、管路接頭不匹配、有死體積)是指色譜柱之外的造成色譜峰展寬的成因。

  • 解決方法:在可能的條件下,色譜柱要使用合理管長的管路,連接管內徑盡可能窄小,切口務必平整光滑,同時流速需要合理不要過快,可采用色譜柱推薦的流速,以防止因樣品擴散造成不能反映色譜柱真實柱效等情況發(fā)生。



硅醇基團作用

  • 原因:仔細分析色譜柱內填料表面性質可知:反相色譜柱填料的表面大約被鍵合相覆蓋了一半,其余的就是未被鍵合的硅醇基團。所謂的保留是指樣品分子與鍵合相相互作用的結果。但是,酸性或堿性化合物與硅膠表面殘存的硅醇基團或金屬雜質之間相互作用而引起雙重保留機理,因此,發(fā)生了峰形拖尾。

  • 解決方法:為了減小峰形拖尾,通常可在流動相加入25mM三乙胺(抑制劑)。三乙胺能與硅醇基團發(fā)生強烈的相互作用,從而降低或阻斷樣品分子與硅醇基團的作用,以保證保留機理正常進行,并大大緩解了峰形拖尾。建議使用長鏈的硅醇基抑制劑,雖起效較慢,但持續(xù)力較三乙胺長。因為抑制劑分子中除了胺基與硅醇基團發(fā)生極性作用外,大分子中非極性部分與固定相也會發(fā)生反相作用而產(chǎn)生保留現(xiàn)象。如果將抑制劑加至樣品中,效果會顯著。



柱內金屬污染

  • 原因:柱內金屬污染(Fe,Ni等)可引起峰形拖尾。金屬可由填料本身帶進,也可由腐蝕性流動相緩慢溶解柱進口的金屬濾片,隨流動相沉積到柱填料中。

  • 解決方法:若色譜柱內填料被金屬污染后,造成酸/堿性樣品拖尾,可用堿洗/酸洗后再鍵合的填料。


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