核磁樣品配置

一般來說，越多越好。典型濃度范圍為100μm至100 mM，但也可能在該范圍之外工作。5毫米管所需體積為500微升，1.7毫米管所需體積為35微升。請注意，信噪比的增加和掃描次數(shù)關(guān)系是開平方根，也就是說將樣品濃度減半需要四倍長的實(shí)驗(yàn)時(shí)間才能產(chǎn)生相同的靈敏度。

譯者注：這一點(diǎn)很重要，如果你的樣品很稀，請注意溶劑量不要太多。但是也不要因?yàn)橄胩岣邩悠窛舛?，樣品量太少?毫米核磁管所需體積量500微升），因?yàn)闃悠妨刻贂?huì)導(dǎo)致勻場不好，勻場不好導(dǎo)致譜峰變寬或者裂分，也會(huì)降低靈敏度。

譯者注：這里面的樣品濃度，其實(shí)和你要采集的核磁實(shí)驗(yàn)類型有關(guān)系。比如你要采集氫譜，那么因?yàn)闅涞暮舜澎`敏度最高，所以需要的濃度其實(shí)不需要很高，常規(guī)核磁探頭樣品濃度在100um到1mM左右就可以了；而碳譜一般需要10mM左右，其他雜核譜圖或者二維譜圖都不一樣。但是我們這邊都是說在可接受的實(shí)驗(yàn)時(shí)間范圍內(nèi)，一般是10分鐘到半小時(shí)的實(shí)驗(yàn)累加時(shí)間所需要的濃度。對于超低溫探頭，濃度還可以更低。

譯者注：這里說的濃度越多越好，也是有限制的。這個(gè)前提是不要影響溶劑粘性，也就是說不能因?yàn)樘珴鈱?dǎo)致溶液太黏，如果太黏也會(huì)導(dǎo)致勻場不好，還會(huì)導(dǎo)致弛豫變快而譜峰變寬。所以一般測試氫譜，濃度不要太高，比較稀的濃度不僅可以避免分子之間相互作用，還可以提高核磁弛豫時(shí)間，使得譜圖分辨率更高。對于有π-π堆積，也需要注意濃度問題。

一般來說，越純越好，但這取決于你想做什么。確認(rèn)反應(yīng)結(jié)果可能只需要檢測特征峰，因此不需要純化。如果您試圖確定未知樣品的結(jié)構(gòu)，那么您的樣品應(yīng)至少為85%純度，并作為單峰從LC中洗脫。用于三維結(jié)構(gòu)測定的生物分子樣品應(yīng)在凝膠上顯示單一條帶。

譯者注：請注意雜質(zhì)也可能來自溶劑。

溶劑應(yīng)進(jìn)行氘化，以避免溶劑信號過大導(dǎo)致覆蓋樣品信號，同時(shí)也可以實(shí)現(xiàn)鎖場來減少核磁信號偏移的可能性。如果樣品上有需要檢測的活潑氫基團(tuán)（例如-NH，-OH），則避免使用D2O和甲醇-d4等質(zhì)子溶劑，而乙腈-d3和DMSO-d6是更好的選擇。如果可能，盡量不要使用混合溶劑，因?yàn)榛旌先軇└y鎖場和勻場。

譯者注：當(dāng)然核磁實(shí)驗(yàn)也可以需要氘代試劑。普通核磁勻場使用的是氘代試劑的氘信號作為勻場，核磁還可以使用1H或者19F作為勻場。另外普通溶劑信號會(huì)有很強(qiáng)的氫譜信號，你也可以使用壓制溶劑峰技術(shù)把溶劑峰壓制下去；還有如果你測試氘譜，你就不能用氘代溶劑了；如果測試31P，當(dāng)然你也可以不用氘代溶劑。

對于生物分子樣品，首選磷酸鹽緩沖液，因?yàn)樗鼈儾粫?huì)引入額外的信號，但Tris、HEPES會(huì)有額外的信號，但是如果在標(biāo)記樣品中使用的話，也是沒有問題的，因?yàn)槲礃?biāo)記化合物的信號將被過濾掉。pH值應(yīng)為生理性或酸性，以減緩酰胺與溶劑的交換。通常會(huì)添加鹽來調(diào)節(jié)PH，但要注意，高濃度（>150 mM）會(huì)使整個(gè)頻率范圍的均勻激發(fā)變得更加困難，并會(huì)增加樣品局部加熱。

譯者注：對于pH的選擇，鹽濃度的選擇，這些都是要綜合生物樣品穩(wěn)定性和譜圖出峰情況來決定的。

你的解決方案應(yīng)該很清楚?；鞚岬娜芤罕砻鳂悠窙]有完全溶解。這樣的溶液將更難勻場，并將導(dǎo)致峰值變寬。如果樣品不溶解，請考慮過濾或離心去除不溶性物質(zhì)。

使用足夠質(zhì)量的管子。低等級或一次性管道將更難勻場，導(dǎo)致更寬的峰值?？山邮躓ilmad 535-PP-7或同等產(chǎn)品。如果使用Shigemi核磁管，確保其為Bruker型，底部長度較小，為8 mm。瓦里安Shigemi管比較長，有可能會(huì)損壞Bruker探頭。

下表列出了不同制造商使用的型號代碼。

不要使用刷子。這可能會(huì)在管的內(nèi)表面上產(chǎn)生劃痕，從而導(dǎo)致磁均勻性降低、勻場效果變差而譜峰變寬。一般情況下，用丙酮、蒸餾水和甲醇沖洗管道就足夠了。最后用氘化水沖洗將交換吸附在玻璃上的質(zhì)子。核磁共振設(shè)備有沖洗5毫米管子的設(shè)備，可以借用。不要在烤箱中烘干管子。熱量將導(dǎo)致管子彎曲，因此勻場變得困難，彎曲的管子可能最終損壞探頭。最好在真空下干燥管道。

必須使用足夠的體積來填充有效檢測區(qū)域。使用較少樣品量會(huì)導(dǎo)致樣品難以勻場，并導(dǎo)致更寬的峰值。使用太多會(huì)稀釋你的樣品和浪費(fèi)溶劑。

下表列出了不同尺寸NMR管的最佳體積和填充高度。請注意，SSPPS NMR設(shè)施沒有任何能夠處理10mm NMR管的探頭（廈門大學(xué)也沒有），3mm管需要一個(gè)特殊的適配器來安裝5mm旋轉(zhuǎn)器，而1mm管可以與1.7mm探頭一起使用（廈門大學(xué)也沒有1.7mm 探頭的液體核磁）。

譯者注：所有液體核磁都是 5mm 探頭，所以這次磁體都沒有辦法使用 10mm 的核磁管。但是可以使用小于 5mm 的核磁管，但是需要有相應(yīng)的適配器。目前高場核磁中心有 1.7 mm，3 mm 的核磁管已經(jīng)相應(yīng)的轉(zhuǎn) 5mm 的適配器。當(dāng)然你可以購買厚壁的核磁管，也就是外徑是 5mm，內(nèi)徑只有 3mm或者更??；也有那種 在轉(zhuǎn)子那邊是5mm外徑，而在檢測區(qū)域只有 3mm 或者更小 1mm 內(nèi)徑的核磁管。

最簡單的方法是使用注射器或移液管，并在將溶液輸送到管底部時(shí)將其倒出。替代長注射器的方案是將含有樣品的1.7 mm NMR管的樣品置于離心管中，并將其離心一到兩分鐘，以便將溶液打入底部。