紫外測試(紫外-可見分光光度法)的測量流程主要分為以下步驟:
一、樣品準備
?溶液配制?:將待測物質(zhì)溶解于適當溶劑(如水、乙醇等),確保溶液澄清、無沉淀或氣泡,避免干擾吸光度測量?
?濃度控制?:根據(jù)待測物質(zhì)的吸光特性調(diào)整濃度,使其在儀器檢測范圍內(nèi)(通常吸光度值在0.2-1.0之間)?。
?衍生化處理?:若物質(zhì)本身不吸收紫外光,需通過化學反應轉(zhuǎn)化為可測衍生物?。
二、儀器設置與校準
?儀器預熱?:開啟紫外可見分光光度計,預熱20-30分鐘以保證光源和檢測器穩(wěn)定?。
?選擇波長?:根據(jù)待測物質(zhì)的吸收特性設定波長(例如蛋白質(zhì)常選214nm,藥物可能選280nm)?。
?基線校準?
三、吸光度測量
?裝樣?:將樣品溶液倒入光學池(比色皿),確保光面清潔無劃痕、液面高度一致(通常為池容積的4/5)?。
?測量操作?:
?重復驗證?:同一樣品需多次測量以確認結(jié)果穩(wěn)定性?。
四、數(shù)據(jù)處理與分析
?定性分析?:通過全波長掃描(200-400nm)繪制吸收光譜,比對標準圖譜或特征吸收峰(如λmax)判斷物質(zhì)種類?。
?定量分析?:根據(jù)朗伯-比爾定律(A=εbc),利用標準曲線法或吸收系數(shù)法計算樣品濃度?。
五、注意事項
?溶液要求?:避免使用渾濁或高濃度溶液,防止光散射或偏離比爾定律?。
?比色皿維護?:每次使用后需用溶劑清洗,避免殘留污染?。
?環(huán)境控制?:避免強光、溫度波動或電磁干擾,確保測量穩(wěn)定性?。
?儀器維護?:定期校準光源、單色器和檢測器,更新儀器軟件參數(shù)?