掃描電鏡-掃描電鏡檢測-掃描電鏡實(shí)驗(yàn)方法 二維碼
發(fā)表時(shí)間:2021-02-21 10:57作者:鑠思百檢測來源:鑠思百檢測 掃描電鏡是介于透射電鏡和光學(xué)顯微鏡之間的一種微觀形貌觀察手段,利用極狹窄的電子束去掃描樣品,通過電子束與樣品的相互作用產(chǎn)生各種效應(yīng)從而微觀成像,其成像富有立體感,利用掃描電鏡我們可直接觀察各種樣品表面的細(xì)微結(jié)構(gòu)。 掃描電鏡應(yīng)用范圍觀察物質(zhì)的形貌/尺寸分析、膜層分析、EDS元素分析(定性、定量、線分布、面分布、超級面分布)、活體細(xì)胞觀察、失效分析、金相分析等。廣泛用于材料、化學(xué)、生物、醫(yī)學(xué)、地質(zhì)等各類領(lǐng)域 實(shí)驗(yàn)流程: 1. 樣品的初步處理 a. 取材樣品面積可達(dá)8mm×8mm,厚度可達(dá)5mm。對于易卷曲的樣品如血管、胃腸道粘膜等,可固定在濾紙或卡片紙上,以充分暴露待觀察的組織表面。 b. 樣品的清洗 (1)用等滲的生理鹽水或緩沖液清洗; (2)用5%的蘇打水清洗; (3)用超聲震蕩或酶消化的方法進(jìn)行處理。 c. 固定:固定所用的試劑和透射電鏡樣品制備相同,常用戊二醛及鋨酸雙固定。由于樣品體積較大,固定時(shí)間應(yīng)適當(dāng)延長。也可用快速冷凍固定。 d. 脫水:樣品經(jīng)漂洗后用逐級增高濃度的酒精或丙酮脫水,然后進(jìn)入中間液,一般用醋酸異戊酯作中間液。 a. 空氣干燥法 空氣干燥法又稱自然干燥法,就是將經(jīng)過脫水的樣品,讓其暴露在空氣中使脫水劑逐漸 揮發(fā)干燥。這種方法的最大優(yōu)點(diǎn)是簡便易行和節(jié)省時(shí)間;它的主要缺點(diǎn)是在干燥過程中,組 織會由于脫水劑揮發(fā)時(shí)表面張力的作用而產(chǎn)生收縮變形。因此,該方法一般只適用于表面較 為堅(jiān)硬的樣品。 b. 冷凍干燥法 (1)置于冷凍保護(hù)劑中:將樣品置于冷凍保護(hù)劑中浸泡數(shù)小時(shí)。常用的冷凍保護(hù)劑為10%~20%二甲基亞砜水溶液,或15%-40%甘油水溶液。 (2)驟冷:將經(jīng)過保護(hù)劑處理的樣品迅速投入用液氮預(yù)冷至(150℃的氟利昂冷凍劑中,使樣品中的水分很快凍結(jié)。 (3)干燥:將已凍結(jié)的樣品移到冷凍干燥器內(nèi)已預(yù)冷的樣品臺上,抽真空,經(jīng)幾小時(shí)或數(shù)天后,樣品即達(dá)到干燥。本方法不需要脫水,避免了有機(jī)溶劑對樣品成分的抽提作用,不會使樣品收縮,也是較早使用的方法。但是,由于花費(fèi)時(shí)間長,消耗液氮多,容易產(chǎn)生冰晶損傷,因此未被廣泛應(yīng)用。 真空鍍膜法是利用真空膜儀進(jìn)行的。其原理是在高真空狀態(tài)下把所要噴鍍的金屬加熱,當(dāng)加熱到熔點(diǎn)以上時(shí),會蒸發(fā)成極細(xì)小的顆粒噴射到樣品上,在樣品表面形成一層金屬膜,使樣品導(dǎo)電。噴鍍用的金屬材料應(yīng)選擇熔點(diǎn)低、化學(xué)性能穩(wěn)定、在高溫下和鎢不起作用以及有高的二次電子產(chǎn)生率、膜本身沒有結(jié)構(gòu)?,F(xiàn)在一般選用金或金和碳。為了獲得細(xì)的顆粒,有用鉑或用金-鈀、鉑-鈀合金的。金屬膜的厚度一般為10 nm~20 nm。真空鍍膜法所形成的膜,金屬顆粒較粗,膜不夠均勻,操作較復(fù)雜并且費(fèi)時(shí),目前已經(jīng)較少使用。 4. 拍攝。 服務(wù)說明及結(jié)果: 1. 客戶提供:8-10 mm3 左右的組織塊,取材部位要求盡量精準(zhǔn)。如為細(xì)胞,細(xì)胞數(shù)需≥10^6。 2. 公司提供:基本實(shí)驗(yàn)步驟、藥品、樣品處理、圖片及圖片分析。 3. 實(shí)驗(yàn)周期:25-30個(gè)工作日。 關(guān)鍵詞:掃描電鏡,掃描電子顯微鏡,掃描電鏡檢測 |