生物掃描電鏡SEM

生物掃描電鏡，用于拍攝提供材料的表面形貌情況，拍攝照片為黑白照片；一般用來觀察細(xì)胞外表面的變形以及受損情況等，也可以觀察材料在細(xì)胞表面的分布情況。

在之前的測(cè)試中，同學(xué)們還有是一些不太清楚的地方，可能同學(xué)們?cè)谥蟮乃蜆訙y(cè)試過程中也會(huì)遇到一些問題，在這部分中我們針對(duì)掃描電鏡生物樣品的相關(guān)問題進(jìn)行疑難解答。

1、2.5%戊二醛固定液如何配置？

市場(chǎng)上賣的戊二醛溶液濃度為25%，需要稀釋。戊二醛在堿性條件下或者高溫條件下容易聚合使其教練能力下降，因此需要磷酸緩沖液。戊二醛固定液的一般濃度會(huì)配置在1-4%左右，2.5%是我們通用的濃度，常用的配置比例如下所示：

市售25%戊二醛水溶液               10ml

0.2M磷酸鹽緩沖液（pH7.0）           50ml

蒸餾水加至                         100ml

2、0.2M，pH7.0磷酸緩沖液的配置方法？

A液：Na2HPO4·H2O 31.61g，或者Na2HPO4·7H2O 53.63g，或者Na2HPO4·12H2O 71.64g，加蒸餾水至1000ml

B液：NaH2PO4·H2O 27.6g，或者NaH2PO4·2H2O 31.21g，加蒸餾水至1000ml

0.2M，pH7.0磷酸緩沖液= A液61ml+B液39ml（合起來是100ml）

3、為什么要加固定液？

固定液是為了保持細(xì)胞、組織的固有形態(tài)和結(jié)構(gòu)。

4、掃描電鏡生物樣品制樣流程？

新鮮取材后用2.5%戊二醛固定液固定樣本，4℃過夜放置，倒掉2.5%戊二醛固定液，用0.1M，pH7.0的磷酸緩沖液漂洗樣品三次，每次15min；用1%的鋨酸溶液固定樣品1-2h；小心取出鋨酸廢液，用0.1M，pH7.0的磷酸緩沖液漂洗樣品三次，每次15min；用梯度濃度（包括30%，50%，70%，80%，90%和95%五種濃度）的乙醇溶液對(duì)樣品進(jìn)行脫水處理，每種濃度處理15min，再用100%的乙醇處理兩次，每次20 min。用乙醇與醋酸異戊酯的混合液（V/V=1/1）處理樣品30min，再用純醋酸異戊酯處理樣品1h或放置過夜。臨界點(diǎn)干燥。鍍膜，觀察。處理好的樣品在掃描電鏡中觀察。

溫馨提示

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