生物樣品做掃描怎么做？

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發(fā)表時間：2024-04-18 08:45作者：鑠思百檢測

生物樣品做掃描怎么做？經(jīng)常有同學(xué)選擇武漢鑠思百檢測來進(jìn)行掃描電鏡的樣品測試，大部分同學(xué)送樣是非生物樣品的之類的，相信同學(xué)們對這些非生物樣品的掃描電鏡測試已經(jīng)有一定了解了。那么，生物樣品做掃描電鏡怎么做呢？今天鑠思百檢測小編就帶大家詳細(xì)了解一下吧~

一、生物掃描電鏡介紹

生物掃描電鏡主要利用二次電子成像用于拍攝材料的表面形貌情況，拍攝照片為黑白照片；一般用來觀察細(xì)胞外表面的變形以及受損情況等，也可以觀察材料在細(xì)胞表面的分布情況。

二、生物樣品做掃描電鏡的要求

1.樣本要求：僅接收2.5%戊二醛固定液固定后的生物樣品；

（1）細(xì)胞樣品：用1.5ml的尖底管，離心成團(tuán)（至少黃豆大?。?，加入固定液（固定液加滿離心管，使樣品完全浸沒在固定液中），放置于4°C固定12h后，用泡沫盒加冰袋低溫保存運(yùn)輸。（細(xì)菌樣品要求同細(xì)胞）

（2）塊狀樣品：要求在不影響實(shí)驗(yàn)?zāi)康牡那疤嵯?，觀察面盡量平整，尺寸為厚 2~3mm、長寬 5~6mm。有正反觀察面要求的，制樣前要能夠視覺區(qū)分，不能區(qū)分要在形狀上做標(biāo)記（可在樣本右上角裁剪掉一塊，右上角缺失面是正面（即觀察面），不能用記號筆標(biāo)記）。放置于4°C固定12h后可寄送；放置于4°C固定12h后，用泡沫盒加冰袋低溫保存運(yùn)輸。

注意：樣本管與冰袋隔開，避免固定液結(jié)冰。

三、生物樣品做掃描電鏡的制樣流程

1.取材
細(xì)胞團(tuán)要求至少半個綠豆大小。懸浮培養(yǎng)細(xì)胞/細(xì)菌，離心收集，棄去培養(yǎng)液，加入2.5%戊二醛，于4°C保存。對于貼壁細(xì)胞，先倒去培養(yǎng)液，加入2.5%戊二醛，4°C固定15min，用細(xì)胞刮刮下，離心收集（固定液保留），于4°C保存。組織樣本，離體1-3min內(nèi)取樣，1mm3。如來不及修整組織大小可先于電鏡固定液內(nèi)固定半小時左右待組織變硬以后再修整組織進(jìn)行后固定。超出此范圍后組織會無法完全固定，后續(xù)實(shí)驗(yàn)無法完成，務(wù)必請重視此過程。固定時間：至少4個小時。

2.固定
取好的樣本，加4℃預(yù)冷的2.5-3%戊二醛，在4℃固定4h或過夜（視組織大小決定固定時間，該步驟可延長時間），吸出固定劑，用PBS（0.1M、不含NaCl）浸洗3-5次，每次15min。

3.脫水
用系列梯度酒精（30%、50%、70%、80%、90%、95%、100%）脫水，每種濃度酒精脫水1次，每次10-20min（一般15min），再用100%酒精徹底脫水1-2次，接下來用醋酸異戊酯（香蕉水）替換2次，每次20min。

4.干燥
二氧化碳超臨界干燥儀干燥樣本。
二氧化碳臨界點(diǎn)干燥問題：有些文獻(xiàn)使用了空氣自然干燥，或者冷凍干燥，但是如果實(shí)驗(yàn)條件允許，建議使用二氧化碳臨界點(diǎn)干燥。

5.樣本導(dǎo)電處理
將樣本緊貼于導(dǎo)電碳膜雙面膠上放入離子濺射儀樣品臺上進(jìn)行噴金處理。

噴金相關(guān)問題：噴金的目的是使樣品導(dǎo)電。微生物樣品導(dǎo)電性差，建議延長噴金時間。在一般樣品噴金60 s的基礎(chǔ)上適當(dāng)增加10-20 s。噴金時間也不是越長越好，因?yàn)殡S著噴金時間的增長，金膜的厚度越大，對于樣品的微觀細(xì)節(jié)影響也越大。因此，需要在導(dǎo)電性和減少對樣品結(jié)構(gòu)的破壞之間平衡。

噴鉑問題：鉑顆粒比金小，因此對樣品微觀結(jié)構(gòu)的破壞比金小，但導(dǎo)電性比金差，也比金貴。對于微生物幾微米的尺寸來說，噴金就可以。

6.拍照：掃描電子顯微鏡下觀察采圖。

鑠思百檢測結(jié)果展示：