LC-MS解析的常見問題！

液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀(LC-MS)是將液相色譜儀與質(zhì)譜儀聯(lián)用的儀器，用于樣品定性定量分析。其特點是將應(yīng)用范圍極廣的液相色譜分離方法與靈敏、專屬、能提供分子量和結(jié)構(gòu)信息的質(zhì)譜法結(jié)合起來的一種現(xiàn)代分析技術(shù)。

一、質(zhì)譜分析常見術(shù)語

質(zhì)荷比(mass charge ratio):離子的質(zhì)量(以相對原子量單位計)與它所帶電荷(以電子電量為單位計以)的比值,叫作質(zhì)荷比，簡寫為m/z。質(zhì)荷比是質(zhì)譜圖的橫坐標,是質(zhì)譜定性分析的基礎(chǔ)。

離子豐度(Abundance of ions):檢測器檢測到的離子信號強度。

離子相對豐度(Relative abundance of ions):以質(zhì)譜圖中指定質(zhì)荷比范圍內(nèi)最強峰為100 %,其它離子峰對其歸一化所得的強度。標準質(zhì)譜圖均以離子相對豐度值為縱坐標。譜峰的離子豐度與物質(zhì)的含量相關(guān),因此是質(zhì)譜定量的基礎(chǔ)。

基峰(Base peak):在質(zhì)譜圖中，指定質(zhì)荷比范圍內(nèi)強度最大的離子峰叫作基峰?；宓南鄬ωS度為100 %

本底(Back ground):在與分析樣品的相同條件下，不送入樣品時所檢測到的質(zhì)譜信號，包括化學(xué)噪聲和電噪聲。

總離子流圖(Total ions current,TIC):在選定的質(zhì)量范圍內(nèi),所有離子強度的總和對時間或掃描次數(shù)所作的圖。色質(zhì)聯(lián)用時，TIC即色譜圖。

質(zhì)量色譜圖(Mass chromatograph):指定某一質(zhì)荷比的離子強度對時間或掃描號所作的圖。

二維數(shù)據(jù)(2D Data):液質(zhì)聯(lián)用中,只包含色譜圖的數(shù)據(jù),例如用SIR，MRM方式采集的數(shù)據(jù)（沒有質(zhì)譜信息)。

三維數(shù)據(jù)(3D Data):液質(zhì)聯(lián)用中,同時包含色譜圖和質(zhì)譜圖的數(shù)據(jù),例如用Full Scan方式采集的信息(有質(zhì)譜信息)。

分子離子:分子失去一個電子生成的離子,其質(zhì)荷比等于分子。其質(zhì)荷比等于分子。

準分子離子:指與分子存在簡單關(guān)系的離子,通過它可以確定分子量。例如:分子得到或失去一個氫生成的離子:(M+H)+ ,(M-H)-就是最常見的準分子離子。

碎片離子:分子離子裂解所生成的產(chǎn)物離子。

母離子與子離子:任何離子進一步裂解產(chǎn)生了某離子,則前者稱為母離子，后者稱為子離子。單電荷離子與多電荷離子:只帶一個電荷的離子叫單電荷離子,帶兩個或兩個以上電荷的離子叫多電荷離子,它們時常具有非整數(shù)質(zhì)荷比。

同位素離子:由元素的重同位素構(gòu)成的離子叫作同位素離子,它們在質(zhì)譜圖中總是出現(xiàn)在相應(yīng)的分子離子或碎片離子的右側(cè)。

氮規(guī)則:當化合物不含氮或含偶數(shù)個氮原子時,該化合物的分子量為偶數(shù),當化合物含奇數(shù)個氮原子時,該化合物的分子量為奇數(shù)。API電離方式使用氮規(guī)則時要將準分子離子還原成分子量后再使用。

全掃描(Full Scan):檢測一段質(zhì)荷比范圍離子的采集方式，由每個采樣點提取一張質(zhì)譜圖。掃描時間(Scan Time): Full Scan方式采集數(shù)據(jù)的參數(shù),單位為秒,表示四極桿掃描某一范圍質(zhì)荷比離子的時間。

掃描延遲時間(Inter Scan Delay): Full Scan方式采集數(shù)據(jù)的參數(shù),單位為秒,表示兩次掃描之間的間隔。

選擇離子監(jiān)測(Selected lon Record,SIR):選擇能夠表征某物質(zhì)的一個質(zhì)譜峰進行檢測。

駐留時間(Dwell Time): SIR方式采集數(shù)據(jù)時的一個參數(shù),單位為秒,表示四極桿放行該離子的時間。

多反應(yīng)檢測(Multiple Reaction Monitoring,MRM):串聯(lián)質(zhì)譜的一種采集方式，同時以SIR方式檢測母離子與子離子,特點是高選擇性和高靈敏度相結(jié)合,適用于痕量目標監(jiān)測物的定量分析。El:電子轟擊電離源

FAB:快原子轟擊電離源ESI:電噴霧電離源

APCI:大氣壓化學(xué)電離源

API:大氣壓電離源，泛指ESI和APCIMAIDI:基質(zhì)輔助激光解析電離源

分辨率:在給定樣品的條件下，儀器對相鄰兩個質(zhì)譜峰的區(qū)分能力。

靈敏度:在規(guī)定條件下，對選定化合物產(chǎn)生的某一質(zhì)譜峰，儀器對單位樣品所產(chǎn)生的響應(yīng)值，試驗中常以信噪比表示。

信噪比(S/N):譜峰信號強度與噪音強度的比值。

質(zhì)量范圍(Mass range):質(zhì)譜儀器能測量的離子質(zhì)量下限與上限之間的范圍。

質(zhì)量歧視效應(yīng):質(zhì)譜儀器中一些部件，如質(zhì)量分析器、離子檢測器，對不同質(zhì)量的離子產(chǎn)生偏差響應(yīng)的現(xiàn)象。

二、LC-MS解析

LC-MS液質(zhì)聯(lián)用儀是絕大多數(shù)化學(xué)公司，科研單位都會用的儀器。它大大的提升了實驗員的效率。LC-MS是HPLC和MS的結(jié)合，有兩者的功能，又沒有兩者精確。

液質(zhì)聯(lián)用(LCMS):LC為液相色譜儀；MS為一種能夠生成離子，在氣態(tài)中根據(jù)

質(zhì)荷比的不同將其分離并進行檢測的儀器。

LCMS以液相色譜作為分離系統(tǒng)，質(zhì)譜作為檢測系統(tǒng)，因而兼具有液相色譜高分離度與質(zhì)譜高靈敏度的特點。

分析的樣品在質(zhì)譜部分和流動相分離，被離子化后，經(jīng)質(zhì)譜的質(zhì)量分析器將離子碎片按質(zhì)量數(shù)分開，經(jīng)檢測器得到質(zhì)譜圖。

原理：質(zhì)譜分析是先將物質(zhì)離子化，按離子的質(zhì)荷比分離，然后測量各種離子譜峰的強度而實現(xiàn)分析目的的一種分析方法.以檢測器檢測到的離子信號強度為縱坐標，離子質(zhì)荷比為橫坐標所作的條狀圖就是我們常見的質(zhì)譜圖 。

看LCMS步驟

1）先看MS部分，看有沒有所要離子峰，并且要看清楚該化合物是否有MS信號，是否掩蓋周圍的峰。

2）再看HPLC部分，看含量有多少，并且要看清楚該化合物是否有強的HPLC信號，是否掩蓋周圍的峰。

3）兩者結(jié)合起來看，推測反應(yīng)進行的程度和反應(yīng)產(chǎn)生的雜質(zhì)。

常見加合離子峰

[M+1]：加質(zhì)子

[M+14]：羧酸與甲醇成酯

[M+18]：加NH4

[M+19]：加水（水合）

[M+23]：加鈉離子

[M+39]：加鉀離子

[M+42]：加乙腈

[M+64]：加乙腈加鈉離子（常見于SHIMADZU）

[2M+1]：二聚離子（兩分子公用一個正電子）

[2M+23]：二聚加鈉（兩分子公用一個正電子）

[M+2/2]：分子中有兩個叔氮，容易上兩個質(zhì)子

[一系列相差42的峰]：可能為石蠟油污染

[一系列相差44的峰]：可能為聚乙二醇污染

[M-16]：脫NH3

[M-17]：脫水

[M-44]：羧酸和Cbz中常見，重排后脫CO2

[M-56]：Boc中常見，脫叔丁基

[M-100]：脫Boc

[M-H]：基本離子

[M+X]：X指溶劑或緩沖液中的陽離子

[M-H+S]：溶劑加合離子

注：

（1）上述M均為精確分子量（Exact Mass），而非摩爾分子量（Molecular Weight）

（2）一個氯峰高比M+2/M=3:1；一個溴峰高比M+2/M=1:1；判斷上氯或溴反應(yīng)完成。

常用溶劑在LCMS中的信號響應(yīng)

注意事項

1.在LCMS報告中， MS響應(yīng)強的組分有可能掩蓋MS響應(yīng)弱的組分，可通過提取離子流或扣除背景等方式進行判斷，LCMS報告必須將LC和MS兩部分結(jié)合，相互佐證。

2.在不使用TLC，直接使用LCMS監(jiān)測反應(yīng)時，必須結(jié)合其他手段（如：NMR）進行輔助檢測。特別提示：監(jiān)測反應(yīng)，不能僅僅依賴于LCMS，而不點TLC板。監(jiān)測反應(yīng)的手段，以TLC的使用最為重要，直接、快捷、并為后續(xù)的分離純化提供大量信息。